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      多肽修飾靶向熒光脂質體應用腦內小膠質細胞

      時間:2020-11-10 13:42:27       瀏覽:708

      西安瑞禧生物科技有限公司是西北一家專業從事進口藥用磷脂類產品及其相關產品銷售為主的一家公司,公司目前經營的產品有進口合成磷脂,PEG修飾磷脂,聚乙二醇衍生產品,鞘氨醇,神經酰胺,鞘磷脂等產品。

       

      小膠質細胞是大腦的免疫細胞,是在胚胎發育初期由外周血中的巨噬細胞遷移進入腦組織,在腦組織中分化形成的。作為腦內的免疫細胞,其表面有很多受體表達,可以結合多種類型的分子結構?! ?/span>

       

      針對腫瘤細胞表皮生長因子(EGFR)篩選出含有6個氨基酸的多肽配體。將含D4多肽修飾的熒光脂質體通過尾靜脈注射到荷瘤小鼠體內,小動物活體成像發現熒光多肽脂質體不僅在腫瘤內有聚集,在腦內也有較強的熒光信號。

      此外,有實驗,用洛哌丁胺分子作為“探針”,DSPE-PEG2000-D4形成的膠束為載體,通過小鼠熱水溫浴縮尾和福爾馬林致痛等藥效學實驗,發現D4多肽具有靶向載藥膠束跨越血腦屏障的能力?! ?/span>

       

      基于上述結果及小膠質細胞在血腦屏障中的結構和功能特性,進行D4多肽修飾的靶向熒光脂質體在腦內小膠質細胞的作用研究,操作如下:

       

      一、 EPC/HSPC,Chol和DSPE-PEG2000,FITC-DHPE/Dii為材料,制備不同處方的空白熒光脂質體和D4多肽修飾的靶向熒光脂質體,利用差速震蕩法在大鼠乳鼠中分離得到原代小膠質細胞,與熒光脂質體共同孵育后,用流式細胞儀和共聚焦顯微鏡觀察空白與靶向熒光脂質體與小膠質細胞的體外結合情況。

       

      結果HSPC脂質體在含有2%D4多肽時與小膠質細胞和星型膠質細胞都有較好的結合;熒光共聚焦顯微鏡觀察顯示,靶向脂質體的結合明顯優于非靶向脂質體,且靶向脂質體與小膠質細胞在0.5 h時就有很好的結合,與星型膠質細胞在4h時有較好的結合,而與少突膠質細胞的結合不明顯。

       

      二、 D4脂質體與小膠質細胞在體內的結合,尾靜脈注射3h后,利用磁珠分選方法分離出大腦中的小膠質細胞,流式細胞儀檢測熒光脂質體與小膠質細胞在體內的結合強弱。

       

      結果:D4多肽修飾的脂質體與小膠質細胞的結合與空白脂質體與小膠質細胞的結合有顯著性差異。

       

      三、 為進一步觀察熒光脂質體在腦組織中的分布,用免疫組化的方法,尾靜脈注射熒光脂質體后2 h,4 h和10 h取出完整腦組織,冰凍切片,CD68標記小膠質細胞,DAPI染細胞核后,共聚焦顯微鏡下觀察。

       

      結果4 h時D4多肽脂質體開始靠近小膠質細胞,10 h時,D4多肽修飾的熒光脂質體與小膠質細胞完全結合,而非靶向脂質體與小膠質細胞沒有結合?!?/span>

       

      最后,還可利用主動載藥方法制備阿霉素脂質體,腦部原位注射種植黑色素瘤細胞7天后,尾靜脈給藥,每3天一次,連續兩周,用PET技術比較非靶向與靶向組腦腫瘤大小。

      結果靶向組小鼠與非靶向組小鼠的腫瘤大小都比沒給藥組小,但是靶向組與非靶向組沒有顯著性差異??赡艿脑蚴悄[瘤組織中的血腦屏障被破壞,或者脂質體的毒性也作用于小膠質細胞而導致不能有效地免疫應答。

       

      關鍵詞定制:

      D4多肽修飾的熒光脂質體

      DSPE-PEG2000-D4

      DSPE-PEG2000

      DSPE-PEG2000-FITC

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