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      熒光標記外泌體的步驟解析(含相關外泌體)

      時間:2021-01-29 10:41:00       瀏覽:571

      西安瑞禧生物定制供應熒光標記外泌體、天然活性分子、膽酸、氨基酸、蛋白、配體、多肽、藥物、共聚物、衍生物、抗體、細胞、酶、凝集素、納米、糖類及適配體等。

       

      外泌體(Exosome)是指包含了復雜 RNA和蛋白質的膜性膜泡 (30-150nm),其直徑在30-150nm左右。外泌體的形成過程:細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中而形成外泌體。

      外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中,所有培養的細胞類型也均可分泌外泌體。

       

      制備熒光標記外泌體的步驟如下

      1.取200 ug/ml的C5-馬來酰亞-Alexa488(綠色熒光)或C5-馬來酰亞-Alexa633(紅色熒光)2.5 ul,加入提取好的含60- 100 ug蛋白質的30ul外泌體樣品中,以PBS補足至50ul ,不攪拌的情況下于暗室中室溫孵育60分鐘。

      ⒉.在孵育時將exosome spin columns ( Invitrogen )試劑盒按照說明書準備好并將粉末樹脂于室溫下水合15-30分鐘。

      3.將裝有柱子的收集管于離心機水平轉子中以750x g離心2分鐘,棄收集管,向樹脂中加入熒光染料孵育后的外泌體

      4.將柱子置于1.5ml微量離心管750x g離心3分鐘,多余的染料會被樹脂吸附

      5.熒光標記后的外泌體緩慢加入1000ul不含酚紅的DMEM,于0.22um過濾膜過濾后。分裝并儲存于負80度備用。

       

       

      同時外泌體可與相鄰細胞和遠端組織細胞相互作用,并且涉及許多疾病的發生發展,包括腫瘤等,外泌體還被認為潛在的生物治療藥物的遞送載體,但其具體的作用方式與機制目前仍并不十分明確。因此用熒光探針在不影響外泌體大小和功能的情況下,直接或間接標記細胞外囊泡,可在研究中在不影響功能的情況下實現可視化,幫助相關研究的進行。

       

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