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      科普熒光蛋白標記技術有那些?

      時間:2021-02-02 14:57:44       瀏覽:494

      蛋白標記的主要目的是監測生物過程、輔助檢測(例如化合物的可靠定量、蛋白質修飾的特異性檢測)或者純化標記后的蛋白及其結合對象。蛋白質的標記能夠提高檢測靈敏度以及簡化檢測工作流程。

      目前有多種蛋白質標記技術來幫助我們研究感興趣的蛋白質的豐度、位置、相互作用、翻譯后修飾、功能,乃至監測活細胞中的蛋白質運輸等問題。目前有多種類型的標記物和標記方式可供選擇,但是針對特定的應用應當選擇適合的標記策略。

      熒光蛋白標記

      將目的蛋白與熒光蛋白融合,則能夠實現目的蛋白的細胞內觀察,可用于多色標記和熒光共振能量轉移(FRET)應用,用于可視化蛋白質與其他亞細胞結構的易位,研究蛋白質-蛋白質共定位,檢測來自不同啟動子的基因表達的開始,以及混合細胞群的分離。從早期的綠色熒光蛋白GFP發展到現在,我們已經擁有了覆蓋多種光譜區域的熒光蛋白,包括綠色熒光蛋白、藍色和藍綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、橙色熒光蛋白、紅色熒光蛋白,不同光譜型的熒光蛋白在亮度、光穩定性、分子大小上有所不同。

       

      熒光染料蛋白體外標記

      熒光染料標記蛋白或多肽技術是常見的蛋白體外標記技術,除了GFP等融合表達熒光蛋白之外,目標蛋白經過熒光染料標記可以直接進行活體示蹤、細胞分選等下游實驗操作。

      原理:熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物,受到紫外光或藍紫光照射時,可激發成為激發態,當從激發態恢復基態時,發出熒光。蛋白熒光標記技術利用熒光物質共價結合在目標分子的某個基團上,利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。

      應用和特點:活化的熒光染料,例如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(Rhodamine B)或Alexa Fluor染料等,可用于標記抗體或蛋白功能基團,生成分子探針并通過熒光成像進行檢測。當用熒光染料化學標記特異性抗體或其他純化的生物分子時,它們成為用于檢測靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針,應用于細胞成像、流式細胞術、蛋白質印跡和酶聯免疫吸附實驗(ELISA)。因為熒光標記物具有無放射物污染、操作簡便等優點,使其在蛋白功能研究、藥物篩選等許多研究領域的應用日趨廣泛。

       

      蛋白量子點標記

      原理:量子點(Quantum Dots)是一種無機納米結晶體,它可以根據其大小發出特定波長的熒光,它具有非常高的消光系數,其消光系數要比小分子熒光基團和熒光蛋白高出10~100倍,同時量子點的量子產率也很好。典型的量子點都含有一個CdSe或CdTe核心,外面包裹一硫化鋅(ZnS)外殼。量子點的吸收波長范圍覆蓋從非常短的波長至略低于其發射波長的廣闊范圍,因此一束單波長激發光就可以讓量子點達到多重發射。

      應用和特點:目前研究出的水溶性量子點和油溶性量子點可以與抗體、鏈霉親和素等分子進行偶聯,應用于生物標記檢測、高通量編碼、活體成像及動態示蹤等領域。不過結合了生物大分子的水溶性量子點體積較大(直徑約10 nm~30 nm),從而阻礙了它通過細胞膜結構,因此只能用于經過透化處理的細胞,或者只能對胞外蛋白或可以被細胞內吞的蛋白進行研究。

       

      熒光標記蛋白:

      熒光標記anti-CD4蛋白

      熒光標記血小板糖蛋白

      熒光標記甘露糖 6-磷酸-人血清白蛋白M6P-HSA

      熒光標記熱休克蛋白HSP27

      熒光標記硒結合蛋白 1  SBP1

      熒光標記鋅指蛋白160

      熒光標記微管蛋白α6  α-tubulin

      熒光標記微絲蛋白質粒

      熒光標記微管骨架蛋白質粒

      熒光標記重組靈芝免疫調節蛋白

      熒光標記GSTP1蛋白

      熒光標記乳蛋白

      熒光標記抗原蛋白

      熒光標記納米顆粒包被哈氏弧菌抗原蛋白TssJ

      熒光標記豬血源纖維蛋白

      熒光標記自噬底物蛋白p62

      熒光標記自噬特異性蛋白LC-3Ⅱ  

      熒光標記骨橋蛋白 OPN

      熒光標記當歸蛋白(ASPR) 

      熒光標記內質網跨膜蛋白PERK 

      熒光標記力達霉素輔基蛋白    

      熒光標記LDM輔基蛋白

      熒光標記自噬特異性蛋白LC3-Ⅱ

      熒光標記牛血纖維蛋白原

      熒光標記hVDAC1重組蛋白


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